2008


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Annexes

Annexe 1

Prélèvements en vue des études biologiques et génétiques

Études biologiques

Les études peuvent porter sur les fluides biologiques (sang, urine, liquide céphalo-rachidien), les cheveux et différents tissus, en particulier cérébraux et adipeux.
Les prélèvements biologiques sont à recueillir dans les 8 heures au maximum après le décès. Les échantillons biologiques sont congelés à – 80 °C ou en azote liquide, sauf les cheveux (température ambiante).

Tissus cérébraux*

Paramètres
Quanti té (mg)
Méthodologie
Sites de recherche Coûts
Récepteurs
   
5-HT1A
100
Binding
HAMON M
5-HT2A
100
Binding
Inserm U 677
5-HT2C
100
Binding
CHU Pitié-Salpêtrière, Paris
5-HT3
100
Binding
 
5-HT7
50-100
ARNm
(HIS, qRT-PCR)
 
Transporteurs
   
5-HTT, NAT, DAT
100 x 3
Binding
MAROTEAUX L, GASPAR P
Inserm U 616
Hôpital Pitié-Salpêtrière, Paris
500 € x 3 paramètres = 1 500 €
5-HTT, NAT, DAT, GluT
100
Immuno-localisation
MAROTEAUX L, GASPAR P
VMATs (vésiculaires) (amygdale, hippocampe, nucleus accumbens, cortex frontal)
 
Immuno-localisation
Inserm U 616
Hôpital Pitié-Salpêtrière, Paris
400 € x 5 paramètres = 2 000 €
Enzymes
   
MAO A
100
Activité enzymatique
Pr PARINI A
Inserm U 388, Toulouse
MAO B
 
Quantification ARNm
Pr PARINI A
Inserm U 388, Toulouse
COMT
(nucleus accumbens, striatum, substance noire pars compacta)
50
Activité enzymatique
Pr COSTENTIN J
Pharmacologie
CHU, Rouen
40 € par échantillon
Couplage protéines G
   
[35S]GTP-gamma-S
50
Autoradiographie
HAMON M
Inserm U 677
CHU Pitié-Salpêtrière, Paris
Neurotransmetteurs
   
Kynurénine-tryptophane (IDO)
20
CLHP-EC
SPREUX-VAROQUAUX O, MANEGLIER B
5-HT, 5-HIAA, DA, DOPAC-3-OMD, HVA
100
CLHP-EC
Pharmacologie PIFO
Glutamate/GABA
100
CLHP-EC
Hôpital de Versailles, Le Chesnay
40 € x 3 paramètres = 120 €

* Raphé, nucleus accumbens, hippocampe, amygdale, hypothalamus, striatum, cortex pré frontal médian, cortex orbito-préfrontal, cortex préfrontal dorsolatéral, cervelet, substance noire pars compacta
5-HT : 5-hydroxytryptamine ou sérotonine ; NA : Noradrénaline ; DA : Dopamine ; MAO : Monoamine oxydase ; VMAT : Trans porteurs vésiculaires des monoamines ; COMT : Catéchol-O-méthyltransfé rase ; 5-HIAA : Acide 5 hydroxy-indolacétique ; DOPAC : Acide dihydroxyphénylacétique ; 3-OMD : 3-O-méthyldopamine ou 3-méthoxytyramine ; HVA : Acide homovanillique ; IDO : Indola mine-2,3-dioxygénase ; GABA : Acide gamma-aminobutyrique
PIFO : Faculté de Médecine Paris-Ile de France-Ouest, Université de Versailles, St Quentin en Yvelines (UVSQ) ; HIS : Hybridation in situ ; qRT-PCR : Quantitative Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction ; CLHP-EC : Chromatographie liquide à haute performance avec détection électrochimique

Autres milieux biologiques

Paramètres
Quantité
Méthodologie
Sites de recherche Coûts
Liquide céphalo-rachidien
1-3 ml
  
5-HIAA, HVA
 
CLHP-EC
SPREUX-VAROQUAUX O
5-HT
 
CLHP-EC
Pharmacologie PIFO
Hôpital de Versailles, Le chesnay
40 € x 2 paramètres = 80 €
Sang
17 à 27 ml
  
5-HT plaquettaire
1 ml
CLHP-EC
SPREUX-VAROQUAUX O, MANEGLIER B
Kynurénine/
Tryptophane (IDO)
1 ml (100 ml plasma)
CLHP-EC
Pharmacologie PIFO
5-HIAA, HVA
2 ml (500 ml plasma)
CLHP-EC
Hôpital de Versailles, Le Chesnay
Cotinine
3 ml (1 ml plasma)
CLHP-UV
40 € x 4 paramètres = 160 €
Médicaments
psychotropes,
stupéfiants et éthanol
10 à 20 ml
LC-MS/MS, GC/
MS et LC/ BD
ALVAREZ JC
Pharmacologie PIFO
Hôpital Raymond Poincaré
Garches
B 900 = B 800 = B 120 (B = 0,27 €)
Urines
10-20 ml
  
5-HT
500 ml
CLHP-EC
SPREUX-VAROQUAUX O
Pharmacologie PIFO
Hôpital de Versailles,
Le Chesnay
40 € x 5 paramètres = 200 €
5-HIAA, HVA
250 ml
CLHP-EC
Catécholamines (A+NA+DA)
5 ml (3 ml dosage)
CLHP-EC
Métanéphrines + 3-OMD (COMT)
3 ml (2 ml dosage)
CLHP-EC
PEA
2 ml (1 ml dosage)
CLHP-F
Cheveux
   
Stupéfiants/
benzodiazépines/
antidépresseurs
3 mèches de l’épaisseur d’un crayon coupées au ras du cuir chevelu (dernier mois) et attachées côté racine avec une corde lette
LC-MS/MS (bzp)
GC/MS (stup)
ALVAREZ JC
Pharmacologie PIFO
Hôpital Raymond Poincaré
Garches
B 400 par substance
(opiacé, benzodiazé pine…)
Tissu adipeux
sous-cutané
et interne
   
MAO A
MAO B
SSAO
1 g de tissu adipeux sous-cutané pris dans la région abdominale à 10 cm environ de l’ombilic et à 1 cm de profondeur (ne prélever que du tissu jaune d’aspect très gras, peu conjonctif, et éviter de mettre de la peau)
Si possible, prélever également environ 1 gramme de tissu intra-abdominal, soit près du tube digestif soit près du rein
Activité
enzymatique
CARPENE C
Inserm U 586
Toulouse
100 € par individu (3 mesures)

5-HT : 5-hydroxytryptamine ou sérotonine ; A : Adrénaline ; NA : Noradrénaline ; DA : Dopamine ; MAO : Monoamine oxydase ; COMT : Catéchol-O-méthyltransfé rase ; 5-HIAA : Acide 5 hydroxy-indolacétique ; 3-OMD : 3-O-méthyldopamine ou 3-méthoxytyramine ; HVA : Acide homo vanillique ; IDO : Indolamine-2,3-dioxygénase ; PEA : Phényléthyla mine ; SSAO : Semicarbazide-sensitive amine oxidase PIFO : Faculté de Médecine Paris-Ile de France-Ouest, Université de Versailles, St Quentin en Yvelines (UVSQ) ; HIS : Hybridation in situ ; CLHP : Chromatographie liquide à haute performance ; CLHP-EC : Chromatographie liquide à haute performance avec détection électrochimique ; CLHP-UV : Chro matographie liquide à haute performance avec détection ultra-violet ; CLHP-F : Détection en fluores cence ; GC/MS : Chromatographie gazeuse couplée à la spectrométrie de masse ; LC-BD : Chromatographie en phase liquide couplée à une détection par barrette de diodes ; LC-MS/MS : Chromatographie liquide couplée à un spectromètre de masse en tandem

Études génétiques

Ces études concernent des investigations sur l’ADN du sujet pour l’identification de gènes spécifiques et sur l’ARN pour l’analyse du niveau d’expression de ces gènes.

Constitution de banque d’ADN en vue d’analyses de gènes candidats

L’ADN peut être extrait à partir de quasiment tous les tissus biologiques (y compris les cheveux). Le rendement et les difficultés techniques de ces extractions sont cependant très variables d’un tissu à un autre. Le sang total est le milieu biologique offrant le meilleur rendement et le moins de difficultés techniques d’extraction. Le prélèvement doit être réalisé dans les 24 h maximum suivant le décès :
• 20 ml de sang total sur EDTA (éthylène diamine tétra-acétate) pour permettre l’extraction d’ADN simple ;
• 20 ml de sang total sur ACD (Acid citrate dextrose, un anticoagulant) pour une mise en culture cellulaire, qui offre une source d’ADN inépuisable.
Une fois prélevés, les échantillons doivent être traités dans les 24 h.

Études du profil d’expression (ARN) de gènes candidats
dans les tissus cérébraux

Ces études nécessitent :
• des prélèvements parfaitement caractérisés du point de vue anatomique. En effet, les études s’intéressent aux profils d’expression dans des structures cérébrales précises. Ceci rend le plus souvent nécessaire le prélèvement du cerveau dans son ensemble ;
• des prélèvements dans les 8 h suivant le décès.
Le coût s’élève à 3 € par gène, soit 30 à 300 € par individu, en fonction des polymorphismes étudiés.


Annexe 2

Intérêt de certains paramètres neurobiologiques

Analyse des récepteurs couplés à des protéines G
par la liaison de [35S]GTP-gamma-S

L’intérêt du marquage avec le [35S]GTP-gamma-S réside dans le fait qu’il est induit par l’activation du complexe récepteur-protéine G par un agoniste. Il donne une indication quantitative de l’efficacité de la première étape de transduction du signal au-delà de la simple liaison de l’agoniste à son récepteur. Cette technique permet de révéler toute modification fonctionnelle (hypo- ou hypersensibilité, up- ou down-regulation) des récepteurs couplés aux protéines G (Gi/Go).
Le marquage tissulaire avec le [35S]GTP-gamma-S par analyse autoradiographique de la liaison du nucléotide radioactif induite par un agoniste (complet) est réalisable pour les récepteurs 5-HT1A et 5-HT1B (couplés aux protéines G), les récepteurs cannabinoïdes (CB1) et les récepteurs opiacés (mu, delta) (qui sont aussi d’un intérêt potentiel dans les études envisagées).

Activité de l’indolamine-2,3-dioxygénase (IDO) par dosage
simultané de kynurénine et tryptophane

Le dosage simultané de kynurénine et tryptophane est réalisé par la mesure de l’activité de l’indolamine-2,3-dioxygénase (IDO) dans le tissu cérébral et le plasma (Maneglier et coll., 2004renvoi vers).
Le tryptophane est un acide aminé essentiel indispensable à la synthèse protéique. Il est également le substrat de deux voies métaboliques indispensables : la voie de synthèse de la sérotonine et la voie des kynurénines.
La voie des kynurénines possède de nombreuses propriétés physiologiques. Dans un contexte de déficit en vitamine B3, elle permet la synthèse du cofacteur cellulaire, le NAD (Moffett et Namboodiri, 2003renvoi vers). Elle joue également un rôle prépondérant dans les phénomènes d’immunotolérance comme la tolérance materno-fœtale. L’activation de la voie des kynurénines permet de limiter localement la prolifération des lymphocytes T régulant ainsi la réponse immunitaire associée. L’activation de cette voie entraîne une consommation locale du tryptophane biodisponible limitant ainsi la synthèse protéique des lymphocytes T et engendre la production de divers catabolites, dont la kynurénine (Grohmann et coll., 2003renvoi vers). Certains de ces intermédiaires stimulent l’apoptose des lymphocytes T. Cependant, d’autres catabolites, principalement l’acide quinolinique (puissant agoniste des récepteurs N-méthyl-D-aspartate ou NMDA) sont connus pour être de puissants neurotoxiques (Guillemin et coll., 2005arenvoi vers).
La première enzyme de cette voie, l’indolamine-2,3-dioxygénase, constitue une étape limitante. Elle peut être activée entre autre par les interférons de type I (IFN-α ou IFN-β) et par les interférons de type II (IFN-γ) (Guillemin et coll., 2001renvoi vers et 2005brenvoi vers). De par leurs propriétés immunomodulatrices et antivirales, les IFNs de type I, principalement les IFN-α, sont largement utilisés en clinique (hépatite B et hépatite C chronique). Cependant, l’utilisation clinique d’IFN-α engendre de nombreux effets secondaires (Manns et coll., 2001renvoi vers; Fried et coll., 2002renvoi vers). Après deux mois de traitement, il est décrit chez près de 30 % des patients des troubles neuropsychiatriques pouvant aboutir à des tentatives de suicide (Anisman et coll., 2002renvoi vers; Asnis et coll., 2003renvoi vers). Les origines biologiques de ces phénomènes dépressifs induits par les IFNs ne sont pas clairement définies, mais il semble de plus en plus établi que participerait une activation de l’IDO engendrant une modification du tryptophane biodisponible et/ou une production de métabolites neurotoxiques (Capuron et Ravaud, 1999renvoi vers; Capuron et coll., 2003renvoi vers; Capuron et Miller, 2004renvoi vers; Wichers et coll., 2005renvoi vers). De nombreuses équipes conseillent, préalablement à une mise sous IFN-α, une consultation avec un psychiatre ainsi qu’un traitement par IRS dans certains cas.

Intérêt du dosage de phényléthylamine (PEA)

Ce dosage est un reflet spécifique de l’activité MAO B. Il se fait au niveau urinaire.
En conclusion, dans les études sur le suicide post mortem, les trois déterminations neurobiologiques détaillées ci-dessus ainsi que la détermination du binding des récepteurs 5-HT3 et 5-HT7, de l’immuno-localisation des transporteurs 5-HTT, NAT, DAT, GluT et VMATs (vésiculaires), des activités enzymatiques MAO A, MAO B et COMT et la détermination de l’axe glutamate-GABA n’ont jamais été réalisées. Par ailleurs, la détermination dans les autres milieux biologiques périphériques des différents paramètres biologiques et génétiques apporte un intérêt évident par sa faisabilité in vivo si ces paramètres peuvent être identifiés comme des facteurs associés au suicide.

Bibliographie

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Annexe 3

Liste des services de médecine légale pratiquant des examens post mortem

Lille

Institut de médecine légale et de médecine sociale

Professeur Didier GOSSET
Professeur Valéry HEDOUIN
Place de Verdun
59035 Lille
Tél. : (33) 3 20 62 35 01
Fax : (33) 3 20 62 35 12
mél : didier.gosset@univ-lille2.fr
mél : valery.hedouin@univ-lille2.fr

Amiens

Professeur Olivier JARDE
Hôpital Nord
Place Victor Pauchet
80054 Amiens Cedex 1
Tél. : (33) 3 22 66 83 84
Fax : (33) 3 22 66 85 80
mél : jarde.olivier@chu-amiens.fr

Paris V – Ouest – Garches

Service anatomie et cytologie pathologiques - médecine légale

Professeur Michel DURIGON
Hôpital Raymond Poincaré
92380 Garches
Tél. : (33) 1 47 10 76 80
Fax : (33) 1 47 10 76 83
mél : michel.durigon@rpc.ap-hop-paris.fr

Paris XII

Institut de médecine légale de Paris

Professeur Dominique LECOMTE
2, place Mazas
75012 Paris
Tél. : (33) 1 44 75 47 00
Fax : (33) 1 44 75 47 15

Évry

Docteur Philippe WERSON
UCMG Service médecine légale
Centre hospitalier sud francilien
Quartier du canal
3 rue Pont Amar
Courcouronnes
91014 Evry cedex
Tél. : (33) 1 60 87 50 48
Fax : (33) 1 60 77 98 89

Reims

Service de médecine légale - Faculté de médecine

Professeur Mary-Hélène BERNARD
51, rue Cognacq Jay
51095 Reims Cedex
Tél. : (33) 3 26 91 83 50
Fax : (33) 3 26 91 83 50

Nancy

Service de médecine légale et droit de la santé

Professeur Henry COUDANE
Faculté de Médecine
9, Avenue de la forêt de la Haye
BP 184
54505 Vandoeuvre-les-Nancy Cedex
Tél. : (33) 3 83 68 37 10
Fax : (33) 3 83 68 37 19
mél : Henry.Coudane@wanadoo.fr

Strasbourg

Institut de médecine légale

Professeur Bertrand LUDES
11, rue Humann
67000 Strasbourg Cedex
Tél. : (33) 3 88 24 91 20
Fax : (33) 3 88 35 67 58
mél : Bertrand.LUDES@iml-ulp.u-strasbourg.fr

Besançon

Service de médecine légale

Professeur Jean-Luc CHOPARD
Hôpital Saint-Jacques
Place Saint-Jacques
25000 Besançon
Tél. : (33) 3 81 21 83 94
Fax : (33) 3 81 21 83 11
mél : jean-luc.chopard@ufc-chu.univ-fcomte.fr

Dijon

Service de médecine légale

Professeur Irène FRANÇOIS
Hôpital Général
3, rue du Faubourg Raines
BP 1519
21033 Dijon Cedex
Tél. : (33) 3 80 29 39 16
Fax : (33) 3 80 29 30 16
mél : irene.francois@chu-dijon.fr

Lyon

Institut de médecine légale

Professeur MALICIER
12 Avenue Rockefeller
69008 Lyon
Tél. : (33) 4 78 78 56 12
Fax : (33) 4 78 78 56 23

Grenoble

Unité de médecine légale

Professeur Luc BARRET
CHU de Grenoble
BP 217
38043 Grenoble Cedex 9
Tél. : (33) 4 76 76 55 14
Fax : (33) 4 76 76 51 77
mél : Luc.Barret@ujf-grenoble.fr

Clermont-Ferrand

Institut régional de médecine légale

Professeur Thierry W FAICT
78, Place Henri Dunant
63001 Clermont-Ferrand
Tél. : (33) 4 73 17 82 80
Fax : (33) 4 73 17 82 82
mél : tfaict@chu-clermontferrand.fr

Saint-Étienne

Service de médecine légale

Professeur Michel DEBOUT
Hôpital Bellevue
42055 Saint-Étienne Cedex 2
Tél. : (33) 4 77 12 05 23
Fax : (33) 4 77 42 04 62

Tours

Institut médicolégal

Docteur Patrick O’BYRNE
Hôpital Trousseau
Avenue de la République
Chambray-les-Tours
37044 Tours Cedex 1
Tél. : (33) 2 47 47 75 55
Fax : (33) 2 47 47 75 77
mél : iml-tours@chu-tours.fr
mél : p.obyrne@chu-tours.fr

Limoges

Laboratoire de médecine légale

Professeur Claude PIVA
Président de la société de médecine légale et de criminologie de France
2, rue du Docteur Marcland
87025 Limoges Cedex
Secrétariat : Madame AUTHIER
Tél. : (33) 5 55 43 58 03
Fax : (33) 5 55 43 58 01
mél : martin@alpha1.unilim.fr (mél du Professeur PIVA)

Toulouse

Service médecine légale

Professeur Daniel ROUGE
CHU Rangueil
1 Avenue Jean Poulhès
31403 Toulouse Cedex 4
Tél. : (33) 5 61 32 29 54
Fax : (33) 5 61 32 21 77
mél : rouge.d@chu-toulouse.fr

Montpellier

Service de médecine légale

Professeur Éric BACCINO
Hôpital Lapeyronie
371, Av. du Doyen Gaston Giraud
34295 Montpellier Cedex 5
Tél. : (33) 4 67 33 85 86
Fax : (33) 4 67 33 89 91
mél : e-baccino@chu-montpellier.fr

Marseille

Service de médecine légale

Professeur François CIANFARANI
Professeur Georges LEONETTI
CHU Timone
264 rue St Pierre
13385 Marseille Cedex 5
Tél. : (33) 4 91 38 63 89
Fax : (33) 4 91 92 33 31

Nice

Laboratoire de médecine légale et Anthropologie médicolégale

Department of Forensic Pathology and Forensic Anthropology
Professeur Gérald QUATREHOMME
Faculté de médecine
Avenue de Valombrose
06107 Nice Cedex 2
Tél. : (33) 4 93 37 76 82
Fax : (33) 4 92 03 81 48
mél : gquatreh@unice.fr

Bordeaux

Laboratoire de médecine légale, éthique et droit médical

Site Pellegrin
Professeur Sophie GROMB
Université Victor Segalen Case 102
33076 Bordeaux cedex
Tél. : (33) 5 56 79 98 05
Fax : (33) 5 56 79 98 06
mél : medecine.legale@u-bordeaux2.fr

Poitiers

Service de médecine légale

Docteur Michel SAPANET
CHU
BP 577
86021 Poitiers Cedex
Tél. : (33) 5 49 44 44 47
Fax : (33) 5 49 44 41 32
mél : m.sapanet@chu-poitiers.fr

Angers

Service de médecine légale

Professeur Michel PENNEAU
CHRU d’Angers
4, rue Larrey
49033 Angers Cedex 01
Tél. : (33) 2 41 35 38 07
Fax : (33) 2 41 35 42 47
mél : MiPenneau@chu-angers.fr

Rouen

Institut de médecine légale

Professeur Bernard PROUST
CHU Rouen
1, rue de Germont
76031 Rouen Cedex
Tél. : (33) 2 32 88 82 84
Tél. : (33) 2 32 88 86 73
Fax : (33) 2 32 88 86 76
mél : Bernard.Proust@chu-rouen.fr

Nantes

Laboratoire de médecine légale

Professeur Olivier RODAT
Faculté de Médecine
1, rue Gaston Veil
44035 Nantes
Tél. : (33) 2 40 41 28 33
Fax : (33) 2 40 20 32 08
mél : olivier.rodat@chu-nantes.fr

Rennes

Laboratoire de médecine légale

Professeur Mariannick LE GUEUT-DEVELAY
Faculté de Médecine
2, Avenue du Pr Léon Bernard
35043 Rennes Cedex
Tél. : (33) 2 99 33 69 72
Fax : (33) 2 99 59 30 55
mél : legueut@sunaimed.univ-rennes1.fr


Annexe 4

Évaluation budgétaire de l’étude au Nouveau-Brunswick

Éléments du projet
Coût en dollars canadiens
Coût approximatif en euros**
Coûts de personnel
  
Coordination de la recherche
52 000
35 000
Responsable du recrutement
52 000
35 000
Assistant de recherche (soutien et supervision des interviewers, relecture des anamnèses…)
45 000
30 000
Interviewers : Une personne par région sanitaire, soit 7 régions
Chaque interviewer devra être libéré 10 à 12 heures par semaine
Charges des interviewers :
- réaliser la totalité des entrevues au domicile des familles ;
- faire un suivi téléphonique avec les personnes endeuillées suite aux entrevues ;
- assurer les interventions nécessaires si les personnes sont en détresse ;
- rédiger une anamnèse selon les critères de l’étude (symptomatologie pour les SCID I et II, trajectoire de vie et trajectoires des services reçus)
96 000
(Évaluation approximative)
64 000
Membres du panel pour la recherche sur les services
Les membres (psychiatre, travailleuse communautaire, directrice du programme des soins aigus) devront être libérés environ 1 journée et demie par semaine
150 000
(Évaluation approximative)
100 000
Proxy* (pour groupe II : 30 cas)
30 000
20 000
Entrée et analyses des données :
- entrée des données par une étudiante 1 jour/ semaine=5 500 $
- analyses des données (expertise) = 15 000 $
20 500
13 500
Formation :
Formation à l’administration des questionnaires cliniques, rédaction de rapport, suivi et validation
5 000
3 300
Coûts de fonctionnement
  
Frais de déplacement (déplacement, hôtels...) :
- déplacements des chercheurs X 12 = 12 000 $
- déplacements des interviewers = 4 000 $
- déplacements pour la formation X 2 = 2 000 $
- déplacements du panel d’experts Montréal - Fredericton X 6 = 6 000 $
24 000
16 000
Autres dépenses
Téléphone, instruments de mesure, photocopies, enregistreuses, cassettes...
10 000
6 500
Total coût (évaluation approximative)
484 500
323 300

* Le « proxy » est un échantillon de comparaison qui permet une validation de la méthodologie. Comme la méthode d’autopsie psychologique est une investigation au sujet d’une personne décédée auprès de ses proches, la même méthode d’investigation est conservée pour le groupe témoin (groupe ayant fait une tentative de suicide sévère). Ce groupe témoin est alors utilisé comme mesure de validation en prenant un sous-échantillon (n=30), et en plus d’interroger les proches, la même investigation est réalisée auprès du sujet lui-même. Ceci permet de vérifier l’écart entre les données obtenues auprès des proches et celles obtenues auprès du sujet lui-même. ** Sur la base d’un Euro équivalant à 1,5 dollars canadiens.



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