Microscopie de fluorescence à feuille de lumière : La face cachée de l’échantillon enfin dévoilée

Abstract

La microscopie de fluorescence à feuille de lumière (MFL) consiste à illuminer uniquement une fine tranche de l’échantillon perpendiculaire à l’axe du système de détection, limitant ainsi les effets de photoblanchiment et de phototoxicité au plan d’observation. Elle combine les avantages du sectionnement optique instantané et ceux de la tomographie et permet, en fusionnant les images, un rendu tridimensionnel et isotrope. La MFL offre plusieurs avantages par rapport aux techniques classiques de microscopie tridimensionnelle (confocale et multiphotonique). Elle est parfaitement adaptée à l’imagerie statique et dynamique d’échantillons fixés ou vivants avec une résolution subcellulaire même au sein d’embryons.

Light-sheet based fluorescence microscopy (LSM) is an optical technique that becomes more and more popular for multi-view imaging of in vivo sample in its physiological environment. LSM combines the advantages of the direct optical sectioning to the ones of optical tomography by angular scanning. In fact, a thin light-sheet illuminates laterally a section of the sample, thus limiting the effects of photobleaching and phototoxicity only to the plane of interest. The spatial resolution can be improved by combining multiple views obtained along different angle into a single data, leading to a 3D isotropic rendering of the sample. Such an approach provides several advantages in comparison to conventional 3D microscopic techniques: confocal and multiphoton microscopies. It makes LSM an optical tool suited for imaging specimens with a subcellular resolution even inside an embryo and with temporal resolution adapted for real-time monitoring of biological processes.